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作業流程
檢體採集
Genomic DNA
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腫瘤庫

 

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基因體辦公室


檢 體 採 集 作 業 標 準 流 程

一、目的:確保腫瘤庫工作人員,可於適當的條件下執行收集腫瘤組織,並且有效的儲存。

二、適用範圍:此標準作業流程是用於腫瘤庫的成員

三、權責:所有腫瘤庫的成員都有義務去遵守標準作業流程。

四、操作用具與試劑:

離心管              Mark

解剖刀片            鋁箔紙

手套                      液態氮冷凍盒

冷凍紙盒        檢體包埋盒

O.C.T Compound    冰桶

五、作業流程:

基於安全考量,所有處理生物樣品的步驟,操作人員都需要穿戴手套作業。

1.   腫瘤庫工作人員每日上班時去病理部取得當天的開刀房排班表。

2.   取得檢體後,記錄病人基本資料(姓名、生日、性別、電話、地址)

3.   請醫師將檢體取一塊腫瘤的部分,一塊正常的部分,放到離心管中,離心管上分別標示TN,並貼上病人名條。

      檢體留存注意事項:

a.  以不影響病理診斷為第一要務。

b.  取檢體前要先紀錄腫瘤大小 若肉眼下不確定有腫瘤者,可以先行留存,事後以石蠟切片或冷凍切片來驗證。

c.  留距離腫瘤最遠外觀上正常的組織

d. 腫瘤組織留存標準:

   d-1 若小於一公分,將腫瘤對切,外觀上若無明顯差異,原則上存下一半;若有明顯差異,留存時注意不可將不同成分切完,必須要至少有一部份留在石蠟中以供病理檢驗;要以液態氮儲存,以便必要時可以從液態氮中取回腫瘤做成石蠟切片,如此不會影響組織形態。

 d-2 若大於一公分,原則同前,留下至少 1x12

4.   Mark 筆在冷凍標本盒內外盒都依序標上病歷號、姓名、檢體類別 (tumor or normal or pre ca)、日期 (西元年月日)

5.   以鋁箔紙做好小船,底部以 Mark 筆標上病歷號及檢體類別,加入 O.C.T Compond 放在相對應的標本盒旁備用。

6.   清洗檢體後,將檢體放入 culture dish,以10號刀片將檢體切成三等份。

7.    一份放入含 O.C.T Compond 的鋁箔紙小船中,再加入一些 O.C.T Compond,避免氣泡產生,將整個小船放到燒杯中。舀液態氮 2~3 匙,加入另一個冰桶中,直到 O.C.T Compond變成白色固狀,將檢體放入冷凍標本盒,迅速存於 -80℃ 冰箱。

8.   一份出來 放到 culture dish,以 10 號刀片將檢體切成數等份(視檢體大小而定)放入以鉛筆標示好病歷號、姓名、檢體類別 (tumor or normal or pre ca)、日期(西元年月日)的冷凍小管。從液態氮桶中拿出最近使用的液態氮冷凍盒,將所有冰上的冷凍小管放入,依照、tumornormal的順序,從新的一列開始放,迅速放入液態氮桶儲存。

9.   將還剩下一份檢體的離心管,倒入 4% paraformadelhyed 必須大於檢體的 10 倍體積,蓋好蓋子後放入 4℃ 冰箱 over night。隔天將檢體拿出放入包埋盒,以鉛筆標示上病歷號、姓名、病理號,拿至病理部上機做石臘包埋。

註:

1. 若檢體量充足則可以增多留存管數,依檢體多寡留存型式優先順序如下:OCT 包埋液態氮儲存石臘包埋。

2. OCT 包埋的檢體切一片冷凍切片,以 H&E 染色,交由腫瘤庫負責病理醫師檢查,確定診斷並以數位相機拍照建檔。

3. 腫瘤入庫登記作業須記載以下內容

a. 病理號碼,病人基本資料。

b. 部位、診斷。

c. 留存種類、管數及重量。

d. 每一管之位置。

e. 檢體從取下到留存完成所耗用的時間。

f. 是否有研究用組織保存同意書。

g. 是否有品質資料及冷凍切片數位影像資料。

4. 腫瘤組織、正常組織、或轉移腫瘤之冰凍切片品質資料在一個月內結案。